כרומטוגרפיה, המכונה גם "ניתוח כרומטוגרפי", "כרומטוגרפיה", היא שיטת הפרדה וניתוח, לה מגוון רחב מאוד של יישומים בכימיה אנליטית, כימיה אורגנית, ביוכימיה ותחומים נוספים.
מייסד הכרומטוגרפיה הוא בוטנאי רוסי M.Tsvetter.בשנת 1906 פרסם הבוטנאי הרוסי זווטר את תוצאות הניסוי שלו: על מנת להפריד פיגמנטים צמחיים, הוא שפך תמצית אתר נפט המכילה פיגמנטים צמחיים לתוך שפופרת זכוכית המכילה אבקת סידן פחמתי וחילץ אותה עם אתר נפט מלמעלה למטה.מכיוון שלפיגמנטים שונים יש יכולות ספיחה שונות על פני חלקיקי הסידן פחמתי, בתהליך השטיפה, פיגמנטים שונים נעים למטה במהירויות שונות, וכך נוצרים להקות בצבעים שונים.מרכיבי הפיגמנט הופרדו.הוא קרא לשיטת ההפרדה הזו כרומטוגרפיה.
ייצוג סכמטי של ניסוי הפרדת פיגמנטים של עלי צמחים
עם ההתפתחות המתמשכת של שיטות ההפרדה, יותר ויותר חומרים חסרי צבע הופכים למושא ההפרדה, גם הכרומטוגרפיה איבדה בהדרגה את המשמעות של "צבע", אך השם נמצא בשימוש עד היום.
סיווג כרומטוגרפי
מהות הכרומטוגרפיה היא תהליך שבו המולקולות שיש להפריד מחולקות ומאוזנות בין השלב הנייח לשלב הנייד.חומרים שונים מחולקים באופן שונה בין שני השלבים, מה שגורם להם לנוע במהירויות שונות עם הפאזה הניידת.עם תנועת השלב הנייד, רכיבים שונים בתערובת מופרדים זה מזה בשלב הנייח.בהתאם למנגנון, ניתן לחלק אותו למגוון קטגוריות.
1, על פי סיווג המצב הפיזי הדו-שלבי
שלב נייד: כרומטוגרפיית גז, כרומטוגרפיה נוזלית, כרומטוגרפיית נוזלים סופר-קריטית
שלב נייח: גז-מוצק, גז-נוזל;נוזל-מוצק, נוזל-נוזל
2, על פי הצורה של סיווג פאזה נייח
כרומטוגרפיה של עמודות: כרומטוגרפיה של עמודות ארוזות, כרומטוגרפיה של עמודות נימיות, כרומטוגרפיה של עמודות מיקרו, כרומטוגרפיה הכנה
כרומטוגרפיה מישורית: כרומטוגרפיית נייר, כרומטוגרפיה שכבה דקה, כרומטוגרפיה של ממברנות פולימריות
3, מסווג לפי מנגנון ההפרדה
כרומטוגרפיה ספיחה: רכיבים שונים מופרדים בהתאם ליכולות הספיחה והספיחה שלהם על סופחים
כרומטוגרפיה מחיצה: הרכיבים השונים מופרדים לפי מסיסותם בממס
כרומטוגרפיה של אי הכללה מולקולרית: לפי גודל הגודל המולקולרי של ההפרדה בכרומטוגרפיה של חילופי יונים: מרכיבים שונים של הזיקה להפרדת שרף מחליף יונים
כרומטוגרפיה זיקה: הפרדה באמצעות נוכחות של זיקה ספציפית בין מקרומולקולות ביולוגיות
אלקטרופורזה קפילרית: הרכיבים הופרדו בהתאם להבדלים בניידות ו/או התנהגות מחיצה
כרומטוגרפיה כיראלית משמשת להפרדה וניתוח של תרופות כיראליות, אותן ניתן לחלק לשלוש קטגוריות: שיטת ריאגנט נגזרת כיראלית;שיטת תוספת פאזה ניידת כיראלית;שיטת רזולוציית פאזה נייחת כיראלית
טרמינולוגיה בסיסית לכרומטוגרפיה
העקומות המתקבלות על ידי שרטוט אותות התגובה של הרכיבים לאחר זיהוי הפרדה כרומטוגרפית מול זמן נקראות כרומטוגרמות.
קו בסיס:בתנאים כרומטוגרפיים מסוימים, עקומת האות שנוצר כאשר רק הפאזה הניידת עוברת דרך מערכת הגלאים נקראת קו הבסיס, כפי שמוצג בקו ot.כאשר מצב הניסוי היה יציב, קו הבסיס היה קו מקביל לציר האופקי.קו הבסיס משקף את הרעש של המכשיר, בעיקר הגלאי, לאורך זמן.
גובה שיא:המרחק האנכי בין נקודת השיא הכרומטוגרפית לקו הבסיס, המסומן ב-h, כפי שמוצג בקו AB '.
רוחב אזור:רוחב האזור של השיא הכרומטוגרפי קשור ישירות ליעילות ההפרדה.קיימות שלוש שיטות לתיאור רוחב שיא כרומטוגרפי: סטיית תקן σ, רוחב שיא W ו-FWHM W1/2.
סטיית תקן (σ):σ הוא חצי המרחק בין שתי נקודות הפיתול בעקומת ההתפלגות הנורמלית, והערך של σ מציין את מידת הפיזור של הרכיבים הרחק מהעמודה.ככל שהערך של σ גדול יותר, כך מרכיבי הקולחים מפוזרים יותר, ואפקט ההפרדה גרוע יותר.לעומת זאת, מרכיבי הקולחים מרוכזים והשפעת ההפרדה טובה.
רוחב שיא W:נקודות החיתוך משני צידי הפסגה הכרומטוגרפית משמשות כקווים משיקים, והחתך בקו הבסיס נקרא peak width, או רוחב קו הבסיס, שניתן לבטא גם כ-W, כפי שמוצג באיור IJ.על פי עקרון ההתפלגות הנורמלית, ניתן להוכיח שהקשר בין רוחב שיא לסטיית תקן הוא W=4σ.
W1/2:רוחב השיא במחצית מגובה השיא נקרא FWHM, כפי שמוצג עבור המרחק של GH.W1/2=2.355σ, W=1.699W1/2.
W1/2, W שניהם נגזרים מ-σ ומשמשים לחישוב שטחי שיא בנוסף למדידת אפקט העמודה.מדידת FWHM נוחה יותר והנפוץ ביותר.
סיכום קצר
מעקומת שיא היציאה הכרומטוגרפית, ניתן להשיג את המטרות הבאות:
א, ניתוח איכותי בוצע בהתבסס על ערך השמירה של פסגות כרומטוגרפיות
ב, ניתוח כמותי המבוסס על השטח או השיא של השיא הכרומטוגרפי
ג. יעילות ההפרדה של העמוד הוערכה לפי ערך השמירה ורוחב השיא של השיא הכרומטוגרפי
נוסחת החישוב המעורבת בכרומטוגרפיה
1. ערך שימור
ערך השמירה הוא פרמטר המשמש לתיאור המידה שבה רכיב מדגם נשמר בעמודה ומשמש כאינדיקטור לאפיון כרומטוגרפי.שיטת הייצוג שלו היא כדלקמן:
זמן שמירה tR
זמן המוותtM
התאם את זמן השמירה tR'=tR-tM
(סה"כ זמן שהייה בשלב נייח)
נפח השמירה
VR=tR*F.(לא תלוי במהירות הפאזה הניידת)
נפח מת
VM=tM*Fc
(החלל שאינו תופס על ידי השלב הנייח בנתיב הזרימה מהמזרק לגלאי)
התאם את עוצמת השמירה VR'=ת'ר*Fc
2. ערך שימור יחסי
ערך שמירה יחסי, הידוע גם כגורם הפרדה, יחס מקדם חלוקה או גורם קיבולת יחסי, הוא היחס בין זמן השמירה (נפח) המותאם של הרכיב שנבדק לזמן השמירה המותאם (נפח) של התקן בתנאים כרומטוגרפיים מסוימים.
ערכי שמירה יחסיים שימשו כדי לבטל את ההשפעה של תנאי הפעלה מסוימים, כגון קצב זרימה ואובדן קיבוע, על ערכי שמירה.התקן בערך השמירה היחסי יכול להיות רכיב בדגימה שנבדקה או תרכובת שנוספה באופן מלאכותי.
3. מדד שימור
אינדקס ההחזקה הוא אינדקס ההחזקה של החומר i שייבדק בתמיסה קבועה X. שני n-אלנים נבחרים כחומרי ייחוס, לאחד מהם מספר פחמן N ולשני יש N+n.זמן ההחזקה המותאם שלהם הוא t 'r (N) ו-t 'r (N+n), בהתאמה, כך שזמן ההחזקה המותאם t 'r (i) של החומר i שייבדק נמצא בדיוק ביניהם, כלומר, t'r (N).
ניתן לחשב את מדד השימור באופן הבא.
4. גורם קיבולת (k)
בשיווי משקל, היחס בין המסה של רכיב בשלב (s) נייח לשלב הנייד (m), הנקרא גורם הקיבולת.הנוסחה היא כדלקמן:
5、מקדם חלוקה (K) בשיווי משקל, היחס בין הריכוז של רכיב בשלב (s) הנייח לשלב הנייד (m), הנקרא מקדם חלוקה.הנוסחה היא כדלקמן
הקשר בין K ל-k:
זה משקף את סוג העמודה ואת המאפיינים החשובים של המבנה שלו
סיכום קצר
הקשר בין ערך השמירה ומקדם הקיבולת ומקדם החלוקה:
ההפרדה הכרומטוגרפית מבוססת על ההבדל ביכולת הספיחה או הפירוק של כל רכיב במדגם יחסי קבוע, אשר ניתן לבטא כמותית על ידי גודל מקדם החלוקה K (או גורם קיבולת k).
לרכיבים בעלי יכולת ספיחה או פירוק חזקה יש מקדם חלוקה גדול (או גורם קיבולת) וזמן שמירה ארוך.לעומת זאת, לרכיבים עם ספיחה או מסיסות חלשים יש מקדם חלוקה קטן וזמן שמירה קצר.
תיאוריה בסיסית של כרומטוגרפיה
1. תורת המגשים
(1) הצג - תיאוריה תרמודינמית
זה התחיל עם דגם צלחת המגדל שהוצע על ידי מרטין וסינג'.
עמוד חלוקה: במגש למספר פעמים של שיווי משקל גז-נוזל, לפי נקודת הרתיחה של ההפרדה השונה.
עמודה: הרכיבים מאוזנים על ידי מחיצות מרובות בין שני השלבים ומופרדים לפי מקדמי חלוקה שונים.
(2) השערה
(1) ישנם מגשים רבים בעמודה, והרכיבים יכולים להגיע במהירות לשיווי משקל החלוקה בתוך מרווח המגש (כלומר, גובה המגש).
(2) השלב הנייד נכנס לעמוד, לא ברציפות אלא פועם, כלומר כל מעבר הוא נפח טור.
(3) כאשר הדגימה נוספה לכל צלחת עמודה, ניתן היה להזניח את הדיפוזיה של הדגימה לאורך ציר העמודים.
(4) מקדם החלוקה שווה בכל המגשים, ללא תלות בכמות הרכיבים.כלומר, מקדם החלוקה קבוע בכל טבן.
(3) עקרון
תרשים סכמטי של תורת המגשים
אם מרכיב של יחידת מסה, כלומר m=1 (לדוגמה, 1mg או 1μg), מתווסף למגש מס' 0, ולאחר שיווי משקל התפלגות, כי k=1, כלומר ns=nm, nm=ns=0.5.
כאשר נפח צלחת (lΔV) של גז נשא נכנס ללוח 0 בצורה של פעימה, גז הנשא המכיל את הרכיב nm בשלב הגז נדחק ללוח 1. בזמן זה, רכיב ns בשלב הנוזלי של צלחת 0 ורכיב ה-nm בשלב הגז של לוח 1 יחולק מחדש בין שני השלבים.לכן, הכמות הכוללת של הרכיבים הכלולים בצלחת 0 היא 0.5, שבה שלבי הגז והנוזל הם כל אחד 0.25, והכמות הכוללת הכלולה בצלחת 1 היא גם 0.5.גם שלבי הגז והנוזל היו 0.25.
תהליך זה חוזר על עצמו בכל פעם שגז חדש של נפח צלחת מופעל לתוך העמודה (ראה טבלה למטה).
(4) משוואת עקומת יציאה כרומטוגרפית
σ הוא סטיית התקן, הוא זמן השמירה, C הוא הריכוז בכל זמן,
C, הוא ריכוז ההזרקה, כלומר כמות הרכיבים הכוללת (אזור שיא A).
(5) פרמטרים של יעילות העמודה
ב-tR קבוע, ככל ש-W או w 1/2 קטן יותר (כלומר, השיא צר יותר), מספר הלוחות התיאורטיים n גדול יותר, גובה הלוחות התיאורטי קטן יותר, ויעילות ההפרדה של העמוד גבוהה יותר.הדבר נכון גם לגבי מגש התיאוריה האפקטיבי neff.לכן, המספר התיאורטי של המגשים הוא מדד להערכת יעילות העמודות.
(5) מאפיינים וחסרונות
> יתרונות
תורת המגש היא חצי אמפירית ומסבירה את צורת עקומת היציאה
מומחשים תהליכי החלוקה וההפרדה של הרכיבים
מוצע אינדקס להערכת יעילות העמודה
> מגבלות
הרכיבים לא באמת יכולים להגיע לשיווי משקל ההתפלגות בשני השלבים:
לא ניתן להתעלם מהפיזור האורך של רכיבים בעמודה:
ההשפעה של גורמים קינטיים שונים על תהליך העברת המסה לא נבחנה.
לא ניתן להסביר את הקשר בין אפקט העמודה ומהירות הזרימה של השלב הנייד:
לא ברור אילו גורמים עיקריים משפיעים על אפקט העמודה
בעיות אלו נפתרות באופן משביע רצון בתורת הקצב.
2. תורת השיעורים
בשנת 1956, החוקר ההולנדי VanDeemter et al.ספג את המושג של תורת המגשים, ושילב את הגורמים הקינטיים המשפיעים על גובה המגש, העלה את התאוריה הקינטית של תהליך כרומטוגרפי - תורת הקצב, וגזר את משוואת VanDeemter.הוא מתייחס לתהליך הכרומטוגרפי כתהליך דינמי שאינו שיווי משקל וחוקר את השפעתם של גורמים קינטיים על הרחבת השיא (כלומר, אפקט העמודה).
מאוחר יותר, גידינגס וסניידר ואחרים.הציע את משוואת קצב כרומטוגרפיית הנוזל (כלומר משוואת Giddings) בהתבסס על משוואת VanDeemter (שנקראת מאוחר יותר משוואת קצב כרומטוגרפיית הגז) ובהתאם להפרש המאפיין בין נוזל לגז.
(1) משוואת ואן דימטר
איפה: H: הוא גובה הלוח
ת: מקדם דיפוזיה של מערבולות
ב: מונח מקדם דיפוזיה מולקולרית
C: מקדם של מונח ההתנגדות להעברת מסה
(2) משוואת גידינגס
ניתוח כמותי ואיכותי
(1) ניתוח איכותני
ניתוח כרומטוגרפי איכותי נועד לקבוע את התרכובות המיוצגות על ידי כל שיא כרומטוגרפי.מכיוון שלחומרים שונים יש ערכי שמירה מוגדרים בתנאים כרומטוגרפיים מסוימים, ניתן להשתמש בערך השמירה כמדד איכותי.שיטות כרומטוגרפיות איכותיות שונות מבוססות כיום על ערכי שימור.
עם זאת, לחומרים שונים עשויים להיות ערכי שמירה דומים או זהים באותם תנאים כרומטוגרפיים, כלומר, ערכי השמירה אינם בלעדיים.לפיכך קשה לאפיין מדגם לא ידוע לחלוטין בהתבסס על ערכי שימור בלבד.אם על בסיס הבנת המקור, מהות ומטרת הדגימה, ניתן לעשות שיקול ראשוני של הרכב הדגימה, ולעשות שימוש בשיטות הבאות כדי לקבוע את התרכובת המיוצגת על ידי השיא הכרומטוגרפי.
1. בקרה איכותית באמצעות חומרים טהורים
בתנאים כרומטוגרפיים מסוימים, לא ידוע יש רק זמן שמירה מוגדר.לכן, ניתן לזהות את הלא נודע באופן איכותי על ידי השוואת זמן ההחזקה של החומר הטהור הידוע באותם תנאים כרומטוגרפיים עם זמן ההחזקה של החומר הלא ידוע.אם השניים זהים, החומר הלא ידוע עשוי להיות חומר טהור ידוע;אחרת, הלא נודע אינו החומר הטהור.
שיטת בקרת החומרים הטהורים חלה רק על החומר הלא ידוע שהרכבו ידוע, שהרכבו פשוט יחסית, והחומר הטהור שלו ידוע.
2. שיטת ערך שימור יחסי
ערך השמירה היחסי α, מתייחס להתאמה בין רכיב i לחומרי ייחוס יחס ערכי השמירה:
זה משתנה רק עם השינוי של טמפרטורת הקיבוע והעמודה, ואין לו שום קשר לתנאי הפעלה אחרים.
בשלב נייח מסוים וטמפרטורת עמודה, ערכי ההחזקה המתואמים של רכיב i וחומר הייחוס נמדדים בהתאמה, ולאחר מכן מחושבים לפי הנוסחה לעיל.ניתן להשוות באופן איכותי את ערכי השימור היחסיים שהתקבלו עם הערכים המקבילים בספרות.
3, הוספת חומרים ידועים כדי להגדיל את שיטת גובה השיא
כאשר ישנם רכיבים רבים בדגימה הלא ידועה, הפסגות הכרומטוגרפיות המתקבלות צפופות מכדי שניתן יהיה לזהות אותן בקלות בשיטה שלעיל, או כאשר המדגם הלא ידוע משמש רק לניתוח הפריט שצוין.
"תחילה עושים כרומטוגרמה של דגימה לא ידועה, ולאחר מכן מתקבלת כרומטוגרמה נוספת על ידי הוספת חומר ידוע לדגימה הלא ידועה."רכיבים עם גבהים גבוהים יכולים להיות ידועים עבור חומרים כאלה.
4. שמרו על השיטה האיכותית של המדד
מדד השמירה מייצג את התנהגות השמירה של חומרים על מקבעים והוא כיום האינדקס האיכותי הנפוץ והמוכר ביותר בעולם ב-GC.יש לו את היתרונות של שחזור טוב, תקן אחיד ומקדם טמפרטורה קטן.
מדד ההחזקה קשור רק למאפייני השלב הנייח ולטמפרטורת העמודה, אך לא לתנאי ניסוי אחרים.הדיוק והשחזור שלו מצוינים.כל עוד טמפרטורת העמודה זהה לזו של השלב הנייח, ניתן ליישם את ערך הספרות לזיהוי, ואין צורך להשתמש בחומר הטהור לצורך השוואה.
(2) ניתוח כמותי
בסיס לכימות כרומטוגרפי:
המשימה של ניתוח כמותי היא למצוא את מאה הרכיבים במדגם המעורב
תוכן חלקי.כימות כרומטוגרפי התבסס על הדברים הבאים: כאשר תנאי ההפעלה היו עקביים, היה
המסה (או הריכוז) של הרכיב הנמדד נקבעת על ידי אות התגובה שניתן על ידי הגלאי
זה פרופורציונלי.כלומר:
בסיס לכימות כרומטוגרפי:
המשימה של ניתוח כמותי היא למצוא את מאה הרכיבים במדגם המעורב
תוכן חלקי.כימות כרומטוגרפי התבסס על הדברים הבאים: כאשר תנאי ההפעלה היו עקביים, היה
המסה (או הריכוז) של הרכיב הנמדד נקבעת על ידי אות התגובה שניתן על ידי הגלאי
זה פרופורציונלי.כלומר:
1. שיטת מדידת שטח שיא
שטח שיא הוא הנתונים הכמותיים הבסיסיים המסופקים על ידי כרומטוגרמות, והדיוק של מדידת שטח השיא משפיע ישירות על התוצאות הכמותיות.נעשה שימוש בשיטות מדידה שונות עבור פסגות כרומטוגרפיות עם צורות פסגות שונות.
קשה למצוא את הערך המדויק של החורף בניתוח כמותי:
מצד אחד בגלל הקושי למדוד במדויק את נפח ההזרקה המוחלט: מצד שני
שטח השיא תלוי בתנאים הכרומטוגרפיים, ויש לשמור על הרצועה הכרומטוגרפית כאשר הערך נמדד
זה לא אפשרי ולא נוח לעשות את אותו הדבר.וגם אם אתה יכול לעשות את זה נכון
הערך המדויק, גם בגלל שאין תקן מאוחד ולא ניתן ליישם ישירות.
2. גורם תיקון כמותי
הגדרה של מקדם תיקון כמותי: כמות הרכיבים הנכנסים לגלאי (מ')
היחס בין שטח השיא הכרומטוגרפי שלו (A) או שיא גובהו () הוא קבוע מידתיות (,
קבוע המידתיות נקרא מקדם התיקון המוחלט עבור הרכיב.
קשה למצוא את הערך המדויק של החורף בניתוח כמותי:
מצד אחד בגלל הקושי למדוד במדויק את נפח ההזרקה המוחלט: מצד שני
שטח השיא תלוי בתנאים הכרומטוגרפיים, ויש לשמור על הרצועה הכרומטוגרפית כאשר הערך נמדד
זה לא אפשרי ולא נוח לעשות את אותו הדבר.וגם אם אתה יכול לעשות את זה נכון
הערך המדויק, גם בגלל שאין תקן מאוחד ולא ניתן ליישם ישירות.
כלומר, מקדם התיקון היחסי של רכיב הוא הרכיב וחומר הייחוס ס'
היחס בין גורמי התיקון המוחלטים.
ניתן לראות כי מקדם התיקון היחסי הוא כאשר איכות הרכיב מול התקן.
כאשר החומר s שווה, שטח השיא של חומר הייחוס הוא שטח השיא של הרכיב
מרובות.אם לרכיב כלשהו יש מסה m ושטח שיא A, אז המספר של f'A
הערכים שווים לשטח השיא של חומר הייחוס עם מסה של.במילים אחרות,
באמצעות מקדם התיקון היחסי ניתן להפריד את אזורי השיא של כל רכיב
המרה לשטח השיא של חומר הייחוס השווה למסה שלו, ואז היחס
התקן מאוחד.אז זו השיטה המנורמלת כדי להבין את האחוז של כל רכיב
בסיס הכמות.
שיטת השגת מקדם תיקון יחסי: ערכי מקדם תיקון יחסי הושוו רק להוויה
המדידה קשורה לתקן ולסוג הגלאי, אלא לרצועת הפעולה
זה לא משנה.לכן, ניתן לשלוף ערכים מהפניות בספרות.אם הטקסט
אם אינך מוצא את הערך הרצוי בהנפקה, תוכל גם לקבוע זאת בעצמך.שיטת קביעה
שיטה: כמות מסוימת של החומר הנמדד עשרה חומרי ייחוס נבחרים ← עשויה לריכוז מסוים
נמדדו אזורי השיא הכרומטוגרפיים A ו-As של שני המרכיבים.
זו הנוסחה.
3. שיטת חישוב כמותית
(1) שיטת נורמליזציה של אזור
סכום התוכן של כל השברים חסרי השיא חושב כ-100% לכימות
השיטה נקראת נורמליזציה.נוסחת החישוב שלו היא כדלקמן:
כאשר P,% הוא אחוז התוכן של הרכיבים שנבדקו;A1, A2... A n הוא רכיב 1. שטח השיא של 1~n;f'1, f'2... f'n הוא מקדם התיקון היחסי לרכיבים 1 עד n.
(2) שיטת תקן חיצונית
שיטת ההשוואה הכמותית בין אות התגובה של הרכיב שייבדק בדגימה לבין הרכיב הטהור שייבדק כבקרה.
(3) שיטת תקן פנימית
מה שנקרא שיטת תקן פנימי היא שיטה שבה מוסיפים כמות מסוימת של חומר טהור לתמיסה הסטנדרטית של החומר הנבדק ולתמיסת הדגימה כתקן פנימי, ולאחר מכן מנתחים ונקבעים.
(3) שיטת הוספה סטנדרטית
שיטת התוספת הסטנדרטית, הידועה גם כשיטת התוספת הפנימית, היא להוסיף כמות מסוימת של (△C)
ההתייחסות של החומר הנבדק נוספה לתמיסת הדגימה לבדיקה, והבדיקה נוספה למבחן
השיא של תמיסת הדגימה לאחר החומר היה גבוה יותר מזה של תמיסת הדגימה המקורית
תוספת השטח (△A) שימשה לחישוב ריכוז החומר בתמיסת הדגימה
תוכן (Cx)
כאשר Axe הוא שטח השיא של החומר שיש למדוד בדגימה המקורית.
זמן פרסום: 27-3-2023